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          Chinese Name

          中文名


          D-熒光素

          English Name

          英文名


          D-Luciferin

          Alias

          別名


          (S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazoly)-2-thiazoline-4-carboxylic acid;Firefly Luciferin


          CAS NO.


          2591-17-5

          Formula

          分子式


          C11H8N203S2

          M.W.

          分子量


          280.32

          Class

          分類


          生化試劑


          活體成像技術(optical in vivo imaging)目前主要采用生物發光(bioluminescence)與熒光(fluorescence)兩種技術,生物發光法是基于熒光素酶能催化底物(D-Luciferin或Coelenterazine)化學發光的原理,將體外能穩定表達熒光素酶的細胞株植入動物體內,與后期注射入體內的底物發生反應利用光學系統檢測光強度,間接反映出細胞數量的變化或細胞的定位。這項技術已被廣泛應用于多個領域,最常用的有腫瘤或疾病動物模型的建立,并可用于病毒學研究、siRNA研究、干細胞研究、蛋白質相互作用研究等。

          原理:常見的熒光素酶有兩種,分別是螢火蟲熒光素酶(firefly luciferase,編碼基因是luc)和海腎熒光素酶(Renilla luciferase,編碼基因是Rluc),前者的底物是D-Luciferin,后者的底物是Coelenterazine。它們共同的作用原理是在ATP和熒光素酶的催化作用下,底物被氧化發光(不同底物光的顏色和波長不同),當底物過量時,產生的光量子數與熒光素酶的濃度呈正相關性。
          應用:
          1)體外化學發光分析(in vitro);
          2)活體成像實驗(in vivo); 
          3)高靈敏度ATP分析;
          4)活細胞、組織或生物體內luc標記基因和熒光素酶-融合基因體內/體外表達的成像分析;
          5)廣泛用于報告基因分析,免疫分析和ATP熒光衛生監測分析;
          步驟:
          Protocol 1In Vitro Bioluminescent Assays / 體外生物發光檢測
          1)用33.3 mL蒸餾水溶解1.0 g D-熒光素,配制成100 mM的儲存液(200×,濃度30mg/ml)?;靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b后-20℃凍存。
          2)用組織培養基1∶200稀釋儲存液,配置工作液(終濃度150μg/mL)。
          3)去除培養細胞的培養基。 
          4)待圖像分析前,向細胞內添加1×熒光素工作液,然后進行圖像分析。
          Protocol 2:In vivo analysis / 活體成像分析
          1)用無菌的PBS(w/o Mg2+、Ca2+)配制D-熒光素工作液(15mg/mL),0.2 um濾膜過濾除菌。一旦使用,保持冰冷且避光。
          2)注射量取決于注射方式,具體如下:
          注射方式劑量靜脈注射(25-27 gauge針頭)按10 uL/g體重濃度,加入相應體積的15 mg/mL熒光素工作液 腹腔注射(25-27 gauge針頭)按10 uL/g體重濃度,加入相應體積的15 mg/mL熒光素工作液肌肉注射(27 gauge針頭)50 uL,濃度為1–2 mg/mL熒光素工作液鼻內注射(pipette)50 uL,濃度為3 mg/mL熒光素工作液3)注射入體內5-10分鐘后,進行成像分析。
          溶解:0.25%濃度溶解于甲醇,形成近乎無色至淺黃色的清夜
          保存:-15°C 避光











          1. Barth et al. Molecular Therapy. 2008, 16. 957-964.
          2. Mahller et al. Cancer Research. 2008, 68 (4). 1170-1179.
          3. Marques et al. Journal of Neurovirology. 2008, 14 (3). 229-238.
          4. Stish et al. J. Neurooncol. 2008, 61 (1). 51-61.
          5. Zhang et al. Cancer Research. 2007, 67. 9389-9397. 6. Baia, G. et al, Brain Pathology, 2007, 18 (2), 172-179.
          7. Barth, A. et al, Molecular Therapy, 2008, 16 (5), 957-964.
          8. Su Y. et al. Clinical and Experimental Metastasis, 2009

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